DESENVOLVIMENTO DE UM PROTOCOLO PARA A IDENTIFICAÇÃO RÁPIDO DE Ceratocystis fimbriata EM TECA (Tectona grandis L. f.) UTILIZANDO RT- qPCR
Diagnóstico molecular; murcha de Ceratocys; Desenvolvimento biotecnológico.
Tectona grandis L. f é uma espécie florestal de alto valor econômico, utilizada na fabricação de móveis de luxo e na construção naval. Em Mato grosso, essa espécie exótica se adaptou bem ao clima, apresentando um elevado potencial produtivo. Entretanto, a cultura da teca tem sido ameaçada pela murcha de Ceratocystis, uma doença fúngica que pode levar à perda da produção. O objetivo deste projeto foi desenvolver um protocolo rápido e simples para a identificação de Ceratocystis fimbriata em madeira de teca por meio de RT-qPCR. O trabalho foi conduzido entre agosto de 2022 e dezembro de 2023, nos laboratórios do Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, em parceria com a empresa TRC – Teak Resources LTDA. Para a extração de DNA, forão utilizados protocolos simples e rápidos, com adaptações para o uso do kit de extração de DNA Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega). A confirmação da quantidade e qualidade do DNA extraído foi realizada por meio da eletroforese em gel de agarose 1% e comparado com o Fluorímetro Qubit® 4.0 (Invitrogen). Foram utilizados 10 iniciadores específicos para o fungo C. fimbriada. Todo o trabaho de bioinformática foi feito utilizando o NCBI, o GeneBank, Blast e Primer3 para desennho dos iniciadores. A PCR quantitativa foi relizada no CFX 96 da BioRad utilizando SYBR® Green. Dos 10 iniciadores desenhados oito funcionaram adequandamente com capaciadade de identificação da presença de DNA do fungo fitopagênico C. fimbrida em concentrações de 1 picograma. Assim concluímos que os iniciadores e protocolo deenvolvido neste trabalho poede ser utilizado para dignóstico preciso da murcha de C. fimbriata em teca.