Banca de QUALIFICAÇÃO: LARISSA LEMES DOS SANTOS

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : LARISSA LEMES DOS SANTOS
DATA : 12/12/2023
HORA: 13:30
LOCAL: Alta Floresta, MT.
TÍTULO:

Estabelecimento de protocolo de extração de DNA e análise da diversidade genética de Mouriri guianensis Aubl.

 

PALAVRAS-CHAVES:

Ácido nucleico, Diversidade genética, Melastomataceae, Roncador.

PÁGINAS: 40
RESUMO:

O método de extração de DNA usando Brometo de Cetil Trimetil Amônio (CTAB) é o protocolo mais aceito para isolamento de DNA vegetal. Entretanto, ajustes são necessários para a otimização do processo, especialmente, em espécies que não possuem protocolo já estabelecido, como é o caso do roncador (Mouriri guianensis Aubl.). O roncador é uma espécie frutífera e considerada uma planta medicinal, pertencente à família Melastomataceae e de grande potencial econômico e ecológico. Dessa forma, o objetivo do trabalho foi estabelecer um protocolo de extração de DNA para o roncador, visando posteriores estudos moleculares. As análises genéticas foram realizadas em populações nativas do roncador com ocorrência natural no estado de Mato Grosso, Brasil. A extração do DNA foi baseada no método de CTAB descrito por Doyle & Doyle (1990) com a adição de polivinilpirrolidona (PVP). Para determinar o melhor protocolo, foram testadas alterações na concentração de CTAB (3% e 5%) e presença e ausência de Proteinase K. A concentração do DNA extraído e as razões A260/A280 e A260/A230 de absorbância foram estimadas por espectrofotometria (ND-3800-OD Nano DOT) e sua integridade analisada por eletroforese em gel de agarose 1%, preparado em tampão TBE 1x (Tris-Borato-EDTA) e corado com brometo de etídio (10 mg mL^-1). A concentração de CTAB no tampão de extração interferiu na qualidade de DNA extraído do roncador. O aumento na concentração de CTAB para 5% foi eficiente, e possibilitou uma extração de DNA de maior integridade, com bandas nítidas e fortes, e sem arraste vertical no gel, entretanto, não influenciou na quantidade de DNA obtida por espectrofotometria. Quanto a pureza do DNA, a média das amostras dos protocolos testados apresentaram valores dentro do intervalo considerado ótimo a razão A260/A280 (1,8 a 2,0), enquanto que para razões A260/A230 obteve-se valores médios abaixo de 1,8. A adição de Proteinase K não apresentou diferença quanto a integridade do DNA extraído, portanto, sugerimos que esse reagente pode ou não ser acrescentado. A qualidade no padrão de bandas apresentado demonstra que os métodos de extração utilizados foram satisfatórios, especialmente com CTAB 5% e podem ser utilizados em estudos moleculares do roncador. Inclusive, é um processo que está em andamento para a finalização da pesquisa.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 32143101 - ANA APARECIDA BANDINI ROSSI
Externo ao Programa - 221762013 - JULIANA DE FREITAS ENCINAS DARDENGO
Externo à Instituição - 019.240.091-61 - ELIANE CRISTINA MORENO DE PEDRI - UNIFRAN
Externo à Instituição - JULLIANE DUTRA MEDEIROS - UFJF